1. 冷凍管應(yīng)如何解凍？
取出冷凍管后， 須立即放入 37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在 1 分鐘
內(nèi)全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由
液氮桶中取出解凍時(shí)， 必須注意安全， 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2. 細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)， 是否應(yīng)馬上去除 DMSO？
除少數(shù)特別注明對 DMSO 敏感之細(xì)胞外， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）， 在
解凍之后， 應(yīng)直接放入含有 10-15ml 新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮
培養(yǎng)基以去除 DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。
3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提
供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無法存活。
4. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營養(yǎng)來源， 所以血清的種類和品質(zhì)對于
細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容
物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會造成細(xì)胞無法存活。
5. 何謂 FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和 FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都
是指胎牛血清， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼， 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指
小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。
6. 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用 5 % 或 10% CO2？或根本沒有影響？ 2
一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為 pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中 NaHCO3
的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的 CO2 濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3 含量為每公升 3.7 g
時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用 10 % CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3 為每公升 1.5 g 時(shí)， 則應(yīng)使用
5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。
7. 何時(shí)須更換培養(yǎng)基？
視細(xì)胞生長密度而定， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即
可。
8. 培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
9. 附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之 trypsin-EDTA 濃度？應(yīng)如何處理？
一般使用之 trypsin-EDTA 濃度為 0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次開瓶
后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中， 保存于–20 ℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成 trypsin 之
活性降低， 并可減少污染之機(jī)會。
10. 懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中， 稀釋細(xì)胞濃度即可， 若培養(yǎng)液
太多時(shí)， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高， 直到無法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)
胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度， 重復(fù)前述步驟
即可。 ! E7 q. r; _# I2 [
11. 欲將一般動物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？
欲回收動物細(xì)胞， 其離心速率一般為 300xg (約 1,000rpm)，5 - 10 分鐘， 過
高之轉(zhuǎn)速， 將造成細(xì)胞死亡。
12. 細(xì)胞之接種密度為何？ + l+ M! p: t* R1 ~3 _! z
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀
釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因。
